微生物限度檢查法步驟？微生物限度檢查法菌液制備的步驟如下：細(xì)菌菌懸液制備：接種至營養(yǎng)肉湯或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中。培養(yǎng)18～24小時(shí)。用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)50～100cfu的菌懸液。白色念珠菌菌懸液制備：接種至改良馬丁培養(yǎng)基或瓊脂中。培養(yǎng)24～48小時(shí)。同樣用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)50～100cfu的菌懸液。那么，微生物限度檢查法步驟？一起來了解一下吧。
微生物限度檢查法中的細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)主要包括以下關(guān)鍵步驟：
培養(yǎng)基適用性檢查：
成品培養(yǎng)基及按處方配制的培養(yǎng)基都需進(jìn)行適用性檢查，以確保其在微生物計(jì)數(shù)方面的準(zhǔn)確性和可靠性。
菌種傳代次數(shù)控制：
菌種試驗(yàn)用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代，以確保試驗(yàn)菌株的生物學(xué)特性得以維持。
特定菌種的選擇：
選擇大腸埃希菌CMCC44 102、金黃色葡萄球菌CMCC26 003、枯草芽孢桿菌CMCC63 501、白色念珠菌CMCC98 001以及黑曲霉CMCC98 003等代表性菌株，進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)，確保計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性和可靠性。
綜上所述，通過精確執(zhí)行這些步驟，可以確保微生物限度檢查法中細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性與可靠性，對(duì)于保證產(chǎn)品質(zhì)量和安全具有重要意義。
可以根據(jù)樣品的具體情況，在無菌情況下取25g樣品，然后放到225ml/g的生理鹽水中進(jìn)行混勻或打勻，這就是10倍稀釋，然后用干凈吸管取1ml，放入9ml生理鹽水中，用新的吸管混勻，這就是100倍稀釋液；直接取1ml放入9ml生理鹽水中，混勻，即1000倍稀釋液，以此類推。
微生物限度檢查法是一個(gè)在藥品、食品和化妝品行業(yè)中廣泛使用的質(zhì)量控制方法，旨在檢測樣品中的微生物數(shù)量和類型。本文將詳細(xì)闡述微生物限度檢查法的判定準(zhǔn)則、計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證以及控制菌檢查方法的驗(yàn)證過程。
在判定微生物限度時(shí)，首先需要比較被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值。如果比值大于70%，且菌落的形態(tài)和大小與對(duì)照培養(yǎng)基上的一致，那么可以判定該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。這一標(biāo)準(zhǔn)確保了培養(yǎng)基能夠準(zhǔn)確反映樣品中的微生物情況。
為了確保微生物計(jì)數(shù)方法的準(zhǔn)確性和適用性，在建立產(chǎn)品的微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證。驗(yàn)證時(shí)，至少需要進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并計(jì)算各試驗(yàn)菌的回收率。具體操作包括使用平皿法和薄膜過濾法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，同時(shí)制備菌液組、供試品對(duì)照組和稀釋劑對(duì)照組，以考察供試液制備過程中的微生物影響。
在試驗(yàn)過程中，需要對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率進(jìn)行逐一驗(yàn)證，確保方法的準(zhǔn)確性和可靠性。當(dāng)驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果顯示稀釋劑對(duì)照組的菌回收率不低于70%，且試驗(yàn)組的菌回收率均不低于70%時(shí)，可以使用該供試液制備方法和計(jì)數(shù)法對(duì)供試品進(jìn)行細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)的測定。若試驗(yàn)中任一次菌回收率低于70%，則需要采用其他方法如培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀法等消除供試品的抑菌活性，并重新進(jìn)行方法驗(yàn)證。
在我們的公司，我們采用薄膜過濾法來檢測純化水中的微生物。首先，我們?nèi)∠喈?dāng)于每張濾膜含1g或1ml的供試品的供試液，然后將其與適量的稀釋劑混合，過濾。如果供試品中的菌數(shù)較多，我們則取適量稀釋劑的供試液1ml進(jìn)行過濾。接下來，我們使用pH為7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或其他適宜的沖洗液來沖洗濾膜，沖洗方法和沖洗量應(yīng)與計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證相同。沖洗完成后，我們?nèi)〕鰹V膜，將菌面向上貼于營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板上進(jìn)行培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基至少準(zhǔn)備一張濾膜。
同時(shí)，我們進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，取試驗(yàn)用的稀釋液1ml，按照上述薄膜過濾法操作。陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長。
對(duì)于培養(yǎng)和計(jì)數(shù)，除非另有規(guī)定，細(xì)菌培養(yǎng)48小時(shí)，霉菌和酵母菌培養(yǎng)72小時(shí)，我們會(huì)逐日點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)。一般情況下，我們以48小時(shí)或72小時(shí)的菌落數(shù)報(bào)告菌數(shù)。若有必要，我們還可以適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間至5至7天，進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)并報(bào)告。
在點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，我們需要計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)，并按照菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。如果同稀釋級(jí)兩個(gè)平板的菌落平均數(shù)不少于15，則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。
關(guān)于菌數(shù)報(bào)告的原則，我們以相當(dāng)于1g或1ml供試品的菌落數(shù)報(bào)告菌數(shù)。
制備微生物限度檢查法所需的菌液，首先，接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌至營養(yǎng)肉湯或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)18～24小時(shí)；白色念珠菌則接種至改良馬丁培養(yǎng)基或瓊脂中，培養(yǎng)24～48小時(shí)。接著，將培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含菌數(shù)50～100cfu的菌懸液。對(duì)于黑曲霉，則先將其接種至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)5～7天，然后加入3～5ml含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，再用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05%(v/v)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1ml含孢子數(shù)50～100cfu的孢子懸液。這些菌懸液在室溫下應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，若保存在2～8℃，則可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液在2～8℃下保存，用于驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用。
進(jìn)行適用性檢查時(shí)，取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各50～100cfu，分別注入無菌平皿中，立即傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置30～35℃培養(yǎng)48小時(shí)，計(jì)數(shù)。白色念珠菌、黑曲霉各50～100cfu的菌液，分別注入無菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，置23～28℃培養(yǎng)72小時(shí)，計(jì)數(shù)。
以上就是微生物限度檢查法步驟的全部內(nèi)容，微生物限度檢查的細(xì)菌與霉菌方法如下：霉菌檢測方法： 樣品準(zhǔn)備：稱取25g樣品，加入225mL的生理鹽水或PBS緩沖液中，充分混勻。 稀釋與接種：選擇適宜的稀釋倍數(shù)，吸取1ml稀釋液加入無菌平板中。 培養(yǎng)基加入：向平板中加入孟加拉紅培養(yǎng)基，確保培養(yǎng)基均勻覆蓋樣品稀釋液。內(nèi)容來源于互聯(lián)網(wǎng)，信息真?zhèn)涡枳孕斜鎰e。如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系刪除。
