微生物菌種鑒定?【答案】:對(duì)于一株未知的細(xì)菌,首先要用經(jīng)典鑒定指標(biāo)進(jìn)行鑒定,包括形態(tài)、生理生化反應(yīng)、生態(tài)特性、生活史、血清學(xué)反應(yīng)以及對(duì)噬菌體的敏感性等。接著需要用現(xiàn)代的微生物學(xué)鑒定技術(shù)包括(G+C)mol%值法、核酸分子雜交法、那么,微生物菌種鑒定?一起來了解一下吧。
注射用水微生物超標(biāo)要做菌種鑒定
傳統(tǒng)方法細(xì)菌做革蘭氏染色 運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn) 各種代謝 然后查伯杰氏細(xì)菌手冊(cè);用分子做的話提總DNA,pcr擴(kuò)增16srDNA全長(zhǎng)片段,上NCBI數(shù)據(jù)庫比對(duì),選擇近緣序列構(gòu)建發(fā)育樹鑒定。
真菌的話主要根據(jù)形余鄭態(tài),特別是有性型生殖形態(tài)鑒定;分子的話一般擴(kuò)增ITS區(qū)域,比對(duì),建樹鑒定。
首先你要確定待鑒定的菌種一定是純種 。如果菌種不純,所觀察到的現(xiàn)象則是混合現(xiàn)象,這樣自然不會(huì)得到正確的結(jié)果。因此在鑒定之前,首先要將菌種純化。 純化方法,一般有2種:平板劃線單菌落分離法和單細(xì)胞分離法。前一種操作簡(jiǎn)便,效果良好,適用范圍廣。
菌種鑒定的方法一般有常規(guī)鑒定和分子生物學(xué)方法:
(1)常規(guī)鑒定:菌落形態(tài)觀察、革蘭氏染色、菌毛染色、糖類分解實(shí)驗(yàn)、吲哚實(shí)驗(yàn)、淀粉水解實(shí)驗(yàn)、V-P實(shí)驗(yàn)、甲寬吵基紅實(shí)驗(yàn)、檸檬酸鹽利用實(shí)驗(yàn)、硝酸鹽還原實(shí)驗(yàn)、接觸酶實(shí)驗(yàn)等
(2)分子生物學(xué)方法:細(xì)菌16SrDNA菌種鑒定:提取DNA,特定引物PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物純化測(cè)序,進(jìn)化樹豎巧頌分析;真菌18S rDNA/ITS菌種鑒定流程也是一樣的。
“+”代表陽性;“-”代表陰性。跟醫(yī)院里的診斷結(jié)果一個(gè)意思
"G+"代表革蘭氏陽簡(jiǎn)仔燃性;"G-"代表革蘭氏陰性戚仔。
是兩組不同的概攔虛念,要區(qū)分概念。
實(shí)驗(yàn)步驟:菌種鑒定工作是各類微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室都經(jīng)常遇到的基礎(chǔ)性工作。不論鑒定對(duì)象屬哪一類,其工作步驟都離不開以下三步:①獲得該微生物的純種培養(yǎng)物;②測(cè)定一系例必要的鑒定指標(biāo);③查找權(quán)威性的鑒定手冊(cè)。一、經(jīng)典分類鑒定方法 群體:菌落形態(tài),在半固體或液體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀態(tài)等
* 形態(tài)個(gè)體:細(xì)胞形態(tài),染色反應(yīng),各種特殊構(gòu)造等
*營(yíng)養(yǎng)要求:能源,碳源,氮源,生長(zhǎng)因子等
*生理、生化反應(yīng)酶;產(chǎn)酶種類和反應(yīng)物性等
* 代謝產(chǎn)物:種橡灶類,產(chǎn)量,顯色嘩如如反應(yīng)等
* 經(jīng)典指標(biāo) 生態(tài)特性:生長(zhǎng)溫度,對(duì)氧的需要,宿主種類等
* 生活史特點(diǎn)
* 血清學(xué)反應(yīng)
* 噬菌體的敏感性
* 其它
經(jīng)典分類法
經(jīng)典分類法是一百多年來進(jìn)行微生物分類的傳統(tǒng)方法。其特點(diǎn)是人為地選擇幾種形態(tài)生理生化特征進(jìn)行分類,并在分類中將表型特征分為主、次。一般在科以上分類單位以形態(tài)特征、科以下分類單位以形態(tài)結(jié)合生理生化特征加以區(qū)分。 * A. 能在 60 o C 以上生長(zhǎng)
* B. 細(xì)胞大,寬度 1.3~1.8mm ………………… 1. 熱微菌屬 ( Thermomicrobium )
* B. 細(xì)胞小,寬度 0.4~0.8mm
* C. 能以葡萄糖為碳源生長(zhǎng)
* D. 能在 pH4.5 生長(zhǎng) …………………………… 2. 熱酸菌屬 ( Acidothermus )
* DD. 不能在 pH4.5 生長(zhǎng) …………………………………… 3. 棲熱菌屬 ( Thermus )
* CC. 不能以葡萄糖為唯一碳源 ……………… 4. 棲熱嗜油菌屬 ( 棲熱嗜獅菌屬 Thermoleophilum )
* AA. 不能在 60 o C 以上生長(zhǎng)
二、現(xiàn)代分類鑒定方法
* 近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展和各項(xiàng)新技術(shù)的廣泛應(yīng)用,促使微生物分類鑒定工作有了飛速發(fā)展。
首先如果你的菌株是自然界中分離得到,就只能鑒定到種,不能鑒定到株,因?yàn)槎喽嗌偕俸推渌晗档募?xì)菌有區(qū)別,即便你做了一些特征的鑒定,發(fā)現(xiàn)和某一株細(xì)菌一模一樣,你也沒有理由說你的細(xì)菌就是那一株細(xì)菌,因?yàn)槟悴豢赡馨阉械奶卣骰痹炊甲鐾辏旰椭曛g的關(guān)系就相當(dāng)于不同的人之間的關(guān)系,世界上不可能有完全相同的兩個(gè)人。除非你知道你的細(xì)菌本來就是某一株細(xì)菌擴(kuò)增出來的(而且要保證沒有變異,否則就是一個(gè)新株),可是這樣就沒必要鑒定了搏明擾。
菌種鑒定一般就只要提取基因組DNA,然后PCR擴(kuò)增16srDNA片段,上GeneBank或者Eztaxon對(duì)比即可。一般序列相似度在97%以上就可以認(rèn)為是同種細(xì)菌(當(dāng)然也有例外,DNA序列僅僅基旦是一個(gè)參考指標(biāo))。
【答案】:對(duì)于一株未知的細(xì)菌,首先要用經(jīng)典鑒定指標(biāo)進(jìn)行鑒定,包括形態(tài)、生理生化反應(yīng)、生態(tài)特性、生活史、血清學(xué)反應(yīng)以及對(duì)噬菌體的敏感性等。接著需要用現(xiàn)代的微生物學(xué)鑒定技術(shù)包括(G+C)mol%值法、核酸分子雜交法、16SrRNA寡核苷酸測(cè)序技術(shù)等手段對(duì)其進(jìn)行分基沒析,最終確定手物該細(xì)菌屬于畢鋒液哪個(gè)種。
以上就是微生物菌種鑒定的全部?jī)?nèi)容,實(shí)驗(yàn)步驟:菌種鑒定工作是各類微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室都經(jīng)常遇到的基礎(chǔ)性工作。不論鑒定對(duì)象屬哪一類,其工作步驟都離不開以下三步:①獲得該微生物的純種培養(yǎng)物;②測(cè)定一系例必要的鑒定指標(biāo);③查找權(quán)威性的鑒定手冊(cè)。 一、。