生物素標(biāo)記試劑盒?產(chǎn)品介紹:超級(jí)生物素快速標(biāo)記試劑盒為用戶提供全面的生物素標(biāo)記解決方案,適用于蛋白、抗體、多肽等大分子的伯氨基(NH2-)標(biāo)記。產(chǎn)品特點(diǎn):1. 優(yōu)化的生物素連接臂設(shè)計(jì),減少空間位阻,適用于細(xì)胞表面標(biāo)記。2. 簡(jiǎn)單的操作流程,無需額外試劑準(zhǔn)備。3. 短時(shí)間完成標(biāo)記過程,僅需90分鐘。那么,生物素標(biāo)記試劑盒?一起來了解一下吧。
ChIRP試劑盒是一種用于研究哺乳動(dòng)物細(xì)胞或組織中l(wèi)ncRNA、circRNA、蛋白與DNA相互作用的實(shí)驗(yàn)工具。其原理是通過設(shè)計(jì)與目標(biāo)RNA序列互補(bǔ)的生物素探針,將目標(biāo)RNA與與其共同作用的DNA染色體片段吸附到鏈霉親和素磁珠上,然后通過qRT-PCR、測(cè)序、Western或質(zhì)譜分析測(cè)定目標(biāo)RNA、DNA序列或蛋白。該方法在全基因范圍內(nèi)定位lncRNA/circRNA結(jié)合位點(diǎn),揭示其在細(xì)胞核內(nèi)的生物學(xué)機(jī)制。試劑盒內(nèi)含高特異性和靈敏度的優(yōu)化試劑,可降低非特異性背景,提高實(shí)驗(yàn)成功率。適用于研究lncRNA與DNA、RNA及蛋白質(zhì)之間的互作,不受lncRNA長(zhǎng)度限制,同樣適用于circRNA的互作研究。產(chǎn)品特點(diǎn)包括體內(nèi)互作研究、結(jié)果可靠、優(yōu)化的緩沖液和方案、短反應(yīng)時(shí)間、多功能性及產(chǎn)物適合多種下游實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)?jiān)谑盏皆噭┖泻螅礃?biāo)簽上的溫度儲(chǔ)存部件,組件在裝運(yùn)之日起6個(gè)月內(nèi)保持穩(wěn)定。廣州如期生物技術(shù)有限公司專注于生命科學(xué)、轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué),提供實(shí)驗(yàn)試劑耗材、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及figure制作服務(wù)。
EMSA實(shí)驗(yàn)用于檢測(cè)蛋白質(zhì)與DNA或RNA的結(jié)合情況,揭示它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)外的相互作用機(jī)制。隨著技術(shù)發(fā)展,EMSA實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用范圍擴(kuò)大,不僅限于蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合的分析,還擴(kuò)展到了蛋白質(zhì)與RNA結(jié)合的研究,如碧云天推出的化學(xué)發(fā)光法RNA EMSA試劑盒。實(shí)驗(yàn)原理基于DNA或RNA與蛋白質(zhì)復(fù)合物在聚丙烯酰胺凝膠電泳中遷移率不同,通過標(biāo)記核酸探針,觀察蛋白質(zhì)是否與其結(jié)合產(chǎn)生“滯后”條帶,進(jìn)而推斷細(xì)胞內(nèi)是否發(fā)生相似的結(jié)合反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)通常設(shè)置包括陰性對(duì)照、常規(guī)反應(yīng)、探針冷競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)、突變探針的冷競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)及super-shift反應(yīng)等分組,以驗(yàn)證探針的特異性及探知結(jié)合蛋白的身份。
EMSA實(shí)驗(yàn)在科學(xué)研究中扮演重要角色,案例一中,中國科學(xué)院青島生物能源與過程研究所的呂雪峰、朱濤等人與德國佛萊堡大學(xué)合作,通過碧云天化學(xué)發(fā)光法EMSA試劑盒(GS009)及BeyoECL Plus (超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒)(P0018)對(duì)cyanobacterium Anabaena sp基因組中的MerR型轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子Alr3614及其同源物進(jìn)行研究,為CAST系統(tǒng)工作模式的認(rèn)知及基因編輯工具的開發(fā)提供了新思路。案例二中,中國農(nóng)業(yè)大學(xué)劉金華及寧夏大學(xué)魏凡華共同通訊在Nature Microbiology雜志上發(fā)表的研究成果,通過碧云天EMSA探針生物素標(biāo)記試劑盒(GS008)成功對(duì)目標(biāo)DNA進(jìn)行了標(biāo)記,研究證明了DNA感應(yīng)器IFI16對(duì)IFN-I的增強(qiáng)產(chǎn)生以抑制甲型流感病毒復(fù)制。
產(chǎn)品介紹:超級(jí)生物素快速標(biāo)記試劑盒為用戶提供全面的生物素標(biāo)記解決方案,適用于蛋白、抗體、多肽等大分子的伯氨基(NH2-)標(biāo)記。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 優(yōu)化的生物素連接臂設(shè)計(jì),減少空間位阻,適用于細(xì)胞表面標(biāo)記。
2. 簡(jiǎn)單的操作流程,無需額外試劑準(zhǔn)備。
3. 短時(shí)間完成標(biāo)記過程,僅需90分鐘。
4. 離心脫鹽去除游離生物素,無需透析或凝膠過濾。
標(biāo)記計(jì)算:標(biāo)記量取決于待標(biāo)記物的濃度和分子量。例如,針對(duì)2mg/ml的IgG(150KD),使用生物素和抗體的分子比為20:1,可實(shí)現(xiàn)最佳效果。其他蛋白根據(jù)實(shí)際情況參照此比例進(jìn)行。
計(jì)算公式:V(μL) = (V1(mL) * C1(mg/mL) * R) / M / C(mM)
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
1. 閱讀使用說明書。
2. 計(jì)算所需生物素量,參照計(jì)算公式。
3. 將試劑盒置于室溫20分鐘。
4. 將生物素配制為10mM濃度。
操作步驟(標(biāo)記1mg抗體為例):
1. 在超濾管中加入待標(biāo)記抗體,使用標(biāo)記緩沖液稀釋至2mg/mL,12,000g離心10分鐘,重復(fù)直至濃度穩(wěn)定。
2. 加入活性超級(jí)生物素,混勻后37℃避光溫育30分鐘。
3. 12,000g離心10分鐘。
4. 使用標(biāo)記緩沖液調(diào)整濃度,重復(fù)離心。
答案
普通DNA Marker可以被生物素或DIG標(biāo)記,但需要使用相應(yīng)的化學(xué)試劑盒進(jìn)行標(biāo)記。其中,生物素和DIG均是常用于核酸檢測(cè)的標(biāo)記物質(zhì)。
解釋
例如,對(duì)于生物素標(biāo)記,可使用生物素-蛋白A(Biotin-Protein A)復(fù)合物或生物素-11-UTP等試劑盒進(jìn)行DNA標(biāo)記;對(duì)于DIG標(biāo)記,則可使用DIG-11-dUTP或DIG-11-dUTP+DNA Pol I等試劑盒進(jìn)行標(biāo)記。標(biāo)記完成后,將DNA Marker與探針(如熒光素探針或辣根過氧化物酶亞硫酸酯探針)結(jié)合,即可進(jìn)行核酸檢測(cè)。需要注意的是,在進(jìn)行DNA標(biāo)記時(shí),應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和需求選擇合適的標(biāo)記物質(zhì)及試劑盒,并嚴(yán)格按照說明書操作。
抗生物素蛋白鏈菌素 為什么用這個(gè)標(biāo)記
該試劑盒是一種時(shí)間分辨的熒光共振能量轉(zhuǎn)移免疫分析,該反應(yīng)是一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)免疫反應(yīng),即銪標(biāo)的cAMP示蹤復(fù)合物與體系中的cAMP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合標(biāo)有Alexa Fluor 647染料的cAMP抗體。銪標(biāo)cAMP示蹤復(fù)合物是通過Biotin標(biāo)記的cAMP與銪標(biāo)的抗生物素蛋白鏈菌素(streptavidin)與抗體的復(fù)合物緊密結(jié)合產(chǎn)生的。
當(dāng)抗體結(jié)合到示蹤劑上時(shí),340nm的激發(fā)光激發(fā)銪標(biāo)分子,導(dǎo)致能量轉(zhuǎn)移到Alexa Fluor 647染料上,結(jié)果產(chǎn)生665nm的發(fā)射光。熒光的強(qiáng)度與樣品中的cAMP含量成反比。
本試劑盒用于檢測(cè)在GPCR激動(dòng)劑刺激下活細(xì)胞或者細(xì)胞膜制備品產(chǎn)生的cAMP。對(duì)于偶聯(lián)Gαs的受體,激動(dòng)劑刺激導(dǎo)致665nm的熒光強(qiáng)度降低,而拮抗劑則可以逆轉(zhuǎn)這一效應(yīng);對(duì)于偶聯(lián)Gαi的受體,在激動(dòng)劑刺激的同時(shí)用forskolin刺激cAMP產(chǎn)生,那么激動(dòng)劑則抑制forskolin誘導(dǎo)的cAMP的生成,因此對(duì)照只給forskolin的細(xì)胞組可以通過665nm熒光強(qiáng)度的增加反應(yīng)激動(dòng)劑的效應(yīng)。
該試劑盒的靈敏度很高,室溫下反應(yīng)在20h內(nèi)是穩(wěn)定的。本試劑盒適用于在384孔板中進(jìn)行24μl的微量分析。
以上就是生物素標(biāo)記試劑盒的全部?jī)?nèi)容,答案普通DNA Marker可以被生物素或DIG標(biāo)記,但需要使用相應(yīng)的化學(xué)試劑盒進(jìn)行標(biāo)記。其中,生物素和DIG均是常用于核酸檢測(cè)的標(biāo)記物質(zhì)。解釋例如,對(duì)于生物素標(biāo)記,可使用生物素-蛋白A(Biotin-Protein A)復(fù)合物或生物素-11-UTP等試劑盒進(jìn)行DNA標(biāo)記;對(duì)于DIG標(biāo)記。