目錄化學發光免疫分析優缺點 化學發光分析儀檢測原理 化學發光免疫技術的基本原理 化學發光檢測原理及流程 生物發光免疫分析原理
化學發光免疫分析儀是通過檢測患者血清從而對人體進行免疫分析的醫學檢驗儀器。將定量的患者血清和辣根過氧化物(HRP)加入到固相包被有抗體的白色不透明微孔板中,血清中的待測分子與辣根過氧化物酶的結合物和固相載體上的抗體特異性結合。分離洗滌未反應的游離成分。然后,加入魯米諾Luminol發光底液 ,利用化學反應釋放的自由能激發中間體,從基態回到激發態,能量以光子的形式釋放。此時,將微孔板置入分析儀內,通過儀器內部的三維傳動,依次由光子計數明皮器讀出各孔的光子數。樣品中的待喚差測分子濃度根據標準品和槐皮建立的數學模型進行定量分析。最后,打印數據報告,以輔助臨床診斷。
化學發光免疫禪友分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免棗歷疫反應賀巖槐相結合,用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術。是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時間分辨熒光免疫分析之后發展起來的一項最新免疫測定技術。
化學發光是利用化學反應產生的能量促使產生能級躍遷,從而發光,典型的如魯米諾檢測血跡;
熒光是一種光致發光現象,必須提供光源去激發分子產生能級躍遷,進而發光。
使用上述兩種方法進行免疫分析時,其區別配鏈很明顯,化學發光無需外加光源,背景干擾小;而熒光則需要外加光源,在垂直光源的方向上檢測,生物樣品中的蛋白質、氨基酸等分子也會產仿輪生背景熒光,背景稍高一些,需要選擇培大孫合適的熒光試劑,以及樣品處理方法以減少非特異性吸附蛋白的影響。
化學發光的原理是,激發態的分子經過結合、光解和重新結合的化學反應,能量從激發態轉變到燃和基態,從而發出光。
關于化學發光檢測原理,化學發光標記免疫分析又稱化學發光免知手疫分析,是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的免疫分析儀器。
在這種反應中,激發態的分子可以通過自發熒光,吸收光能,再釋放出大量的可見皮猛盯光來實現發光。
當光子發出后,化學發光免疫分析儀器中核心探測器件也就是光電倍增管,由單光子檢測并傳輸至放大器,并加高壓電流放大,放大器將模擬電流轉化為數字電流,數字電流將發光信號由R232數據線傳輸給電腦并加以計算,得出臨床結果。
而免疫反應是將發光物質直接標記在抗原(化學發光免疫分析) 或抗體(免疫化學發光分析)上或酶作用于發光底物。
而關于免疫反應體系這里必須講清楚,抗原抗體反應,這個里面是有未知和已知的關系,如果待測物是測抗原,則抗體是已經知道的,如果待測物是測抗體那抗原是已知的。
而前面已經講了化學發光現象,簡單的講就是光信號的強度和待測物濃度是成一定正比關系的,或者是可以通過,相關關系式換算出來的。
1、直接化學發光,標記尺型物為吖啶酯(雅培)或者abei(新產業)
2、酶促化學發光,標記物為堿性磷酸酶(廈門波生)或者辣根過氧化物酶(強生)
3、電化學發光,標記物燃輪為三聯吡啶釕(羅氏陵段猜)
括號內為代表廠家