化學(xué)發(fā)光免疫？一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析法 二、間接化學(xué)發(fā)光免疫分析法 三、化學(xué)發(fā)光免疫分析中的特殊技術(shù)類型 接下來對(duì)這三類進(jìn)行 一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析法。這種方法基于化學(xué)發(fā)光物質(zhì)直接與抗原或抗體結(jié)合，形成復(fù)合物后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號(hào)的原理。其特點(diǎn)包括靈敏度高、特異性強(qiáng)以及操作簡(jiǎn)便等。那么，化學(xué)發(fā)光免疫？一起來了解一下吧。
化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)是一項(xiàng)先進(jìn)的檢測(cè)技術(shù)，將高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測(cè)。
CLIA技術(shù)是繼放射免疫分析、酶免疫分析、熒光免疫分析和時(shí)間分辨熒光免疫分析之后發(fā)展起來的最新免疫測(cè)定技術(shù)。它在靈敏度、特異性、快速性和自動(dòng)化程度方面均表現(xiàn)出色，為醫(yī)學(xué)診斷、科研和工業(yè)應(yīng)用提供了強(qiáng)有力的工具。
CLIA技術(shù)的核心是化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，通過特定的化學(xué)物質(zhì)激發(fā)發(fā)光，其亮度與待測(cè)物質(zhì)的濃度成正比，從而實(shí)現(xiàn)定量分析。該技術(shù)具有高靈敏度，可以檢測(cè)到極低濃度的物質(zhì)，適用于微量檢測(cè)。同時(shí)，化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的穩(wěn)定性好，不易受外界因素干擾，保證了分析結(jié)果的可靠性。
在免疫反應(yīng)方面，CLIA技術(shù)利用抗原-抗體特異性結(jié)合的原理進(jìn)行檢測(cè)。通過標(biāo)記抗原或抗體的熒光或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，當(dāng)與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合時(shí)，產(chǎn)生特定的信號(hào)。通過測(cè)量信號(hào)強(qiáng)度，即可確定待測(cè)物質(zhì)的濃度。
CLIA技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全、藥物研究等領(lǐng)域。例如，在臨床診斷中，可以快速準(zhǔn)確地檢測(cè)疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物，如腫瘤標(biāo)記物、激素水平等，為疾病的早期診斷和治療提供依據(jù)。
化學(xué)發(fā)光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay, CLIA)是一種集高靈敏度化學(xué)發(fā)光測(cè)定與免疫反應(yīng)特異性于一體的檢測(cè)技術(shù)。它專用于檢測(cè)各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等，是繼放射免疫分析、酶免分析、熒光免疫分析和時(shí)間分辨熒光免疫分析之后的新型免疫測(cè)定技術(shù)，誕生于上世紀(jì)70年代中期，由Arakawe首次報(bào)道。
經(jīng)過幾十年的發(fā)展，CLIA已經(jīng)成熟并成為一種先進(jìn)的超微量活性物質(zhì)檢測(cè)手段，其應(yīng)用領(lǐng)域日益廣泛。特別是近十年來，該技術(shù)發(fā)展迅速，被認(rèn)為是當(dāng)前發(fā)展速度最快、應(yīng)用最廣泛的免疫分析方法。相較于酶免法和熒光法，CLIA的靈敏度和精確度有顯著提升，甚至可以取代放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析，其優(yōu)勢(shì)明顯。
CLIA的主要優(yōu)點(diǎn)包括：靈敏度極高，特異性強(qiáng)，試劑成本相對(duì)較低，且試劑穩(wěn)定性良好，通常可以保持6至18個(gè)月的有效期。此外，其方法簡(jiǎn)便，操作快速，檢測(cè)范圍廣泛，且自動(dòng)化程度不斷提高，易于實(shí)施。隨著技術(shù)的進(jìn)步，高靈敏度的化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)正逐步獲得科研人員的認(rèn)可，逐漸成為替代傳統(tǒng)生物檢測(cè)技術(shù)的首選。
擴(kuò)展資料
化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA),是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測(cè)分析技術(shù)。
化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)根據(jù)標(biāo)記方法的不同，主要分為兩種類型：化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析法和酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光酶免疫分析法。
化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析，也稱為化學(xué)發(fā)光免疫分析(CL IA)，是通過將化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記在抗原或抗體上進(jìn)行的免疫分析。常用的發(fā)光標(biāo)記物如吖啶酯類化合物，如Acridinium Ester，其反應(yīng)簡(jiǎn)單快速，無需催化劑。標(biāo)記后的抗原或抗體在特定條件下產(chǎn)生強(qiáng)烈的、瞬時(shí)的閃爍發(fā)光，適用于檢測(cè)小分子抗原（競(jìng)爭(zhēng)法）和大分子抗原（夾心法），具有低非特異性結(jié)合和背景噪音的優(yōu)點(diǎn)，提高了靈敏度。
而酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光酶免疫分析(CL EIA)，實(shí)質(zhì)上是酶免疫分析的延伸，使用酶標(biāo)記的生物活性物質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng)。常見的標(biāo)記酶有過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)，它們分別與魯米諾和其衍生物如異魯米諾等發(fā)光底物結(jié)合。以HRP為例，其標(biāo)記的CLEIA過程是酶與魯米諾在堿性緩沖液中進(jìn)行氧化反應(yīng)，生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)返回基態(tài)時(shí)發(fā)出425nm的光。早期直接標(biāo)記抗原會(huì)降低發(fā)光強(qiáng)度，但現(xiàn)代方法如使用過氧化酶標(biāo)記抗體，再與魯米諾底物結(jié)合，通過酶濃度依賴的發(fā)光反應(yīng)，如Kodak Am erliteTM 半自動(dòng)分析系統(tǒng)所示，增強(qiáng)了分析的靈敏度和效率。
簡(jiǎn)介
發(fā)光現(xiàn)象分為光致發(fā)光、化學(xué)發(fā)光和生物發(fā)光，化學(xué)發(fā)光源自化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能量，生物發(fā)光在自然界廣泛存在。生物發(fā)光分析始于發(fā)現(xiàn)ATP是螢火蟲熒光素酶催化發(fā)光的輔助因子，從而發(fā)展出定量ATP的方法。化學(xué)發(fā)光反應(yīng)釋放不同強(qiáng)度和壽命的光，涵蓋可見光譜范圍，引發(fā)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）在生命科學(xué)、臨床診斷、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全和藥物分析等領(lǐng)域獲得關(guān)注。
化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定
CLIA基于化學(xué)反應(yīng)發(fā)光強(qiáng)度確定樣品濃度，具有高靈敏度、特異性、廣應(yīng)用范圍、簡(jiǎn)易設(shè)備和寬線性范圍。傳統(tǒng)免疫測(cè)定需長(zhǎng)時(shí)間孵化，限制產(chǎn)量和應(yīng)用，快速免疫測(cè)定優(yōu)化了質(zhì)量傳輸和反應(yīng)動(dòng)力學(xué)，縮短分析時(shí)間。多分析物免疫傳感系統(tǒng)的高通量、短時(shí)、低消耗和低成本，使其近年來非常受歡迎。高靈敏度CLIA成為趨勢(shì)，通過減少噪音和提高信號(hào)實(shí)現(xiàn)。標(biāo)記材料高特異性和檢測(cè)靈敏度至關(guān)重要，魯米諾、吖啶酯鹽等底物在CLIA中廣泛應(yīng)用。
化學(xué)發(fā)光免疫反應(yīng)機(jī)制
化學(xué)發(fā)光反應(yīng)產(chǎn)生激發(fā)態(tài)分子，在降至基態(tài)時(shí)發(fā)射光。CL反應(yīng)可以是直接或間接的，通過氧化反應(yīng)產(chǎn)生光。魯米諾和吖啶酯鹽具有不同優(yōu)勢(shì)，在固體、氣體和液體中廣泛應(yīng)用于實(shí)際用途。
化學(xué)發(fā)光標(biāo)簽的化學(xué)反應(yīng)
化學(xué)發(fā)光免疫反應(yīng)中，標(biāo)記材料特異性和檢測(cè)靈敏度至關(guān)重要。
(1)化學(xué)發(fā)光免疫分析是以發(fā)光物質(zhì)作為標(biāo)記物，在反應(yīng)體系中發(fā)光物質(zhì)在堿性介質(zhì)中氧化時(shí)釋放大量自由能，產(chǎn)生激發(fā)態(tài)的中間體，該激發(fā)態(tài)的中間體由最低振動(dòng)能級(jí)回到穩(wěn)定的基態(tài)、各個(gè)振動(dòng)能級(jí)時(shí)產(chǎn)生輻射，同時(shí)產(chǎn)生能量，多余的能量即為發(fā)射光子，從而產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。利用發(fā)光信號(hào)的測(cè)量?jī)x器，分析接收的光量子產(chǎn)額，通過計(jì)算機(jī)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換成被測(cè)物質(zhì)的濃度單位。
(2)化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型：①根據(jù)所采用的標(biāo)記物的不同可分為發(fā)光物標(biāo)記、酶標(biāo)記、元素標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫分析；②根據(jù)所采用的發(fā)光反應(yīng)的體系不同和標(biāo)記物的不同分為：化學(xué)發(fā)光免疫分析、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析、微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析、電化學(xué)發(fā)光免疫分析。
(3)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)系統(tǒng)中以化學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，化學(xué)發(fā)光的首要條件是吸收了化學(xué)能而處于激發(fā)態(tài)的分子或原子必須能釋放出光子或者能將能量轉(zhuǎn)移到另一個(gè)物質(zhì)的分子上并使這種分子激發(fā)，當(dāng)這種分子回到基態(tài)時(shí)釋放出光子。化學(xué)發(fā)光與熒光的根本區(qū)別是形成激發(fā)態(tài)分子的激發(fā)能原理不同。熒光是發(fā)光物質(zhì)吸收了激發(fā)光后使分子產(chǎn)生發(fā)射光，化學(xué)發(fā)光是化學(xué)反應(yīng)過程中所產(chǎn)生的化學(xué)能使分子激發(fā)產(chǎn)生的發(fā)射光。因此，化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中反應(yīng)過程必須產(chǎn)生足夠的激發(fā)能是產(chǎn)生發(fā)光效應(yīng)的重要條件。
以上就是化學(xué)發(fā)光免疫的全部?jī)?nèi)容，1、化學(xué)發(fā)光免疫分析，是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗體或抗原的一類免疫測(cè)定方法。目前常見的標(biāo)記物主要為魯米諾類和吖啶酯類化學(xué)發(fā)光劑。標(biāo)記物為吖啶酯（雅培）或者ABEI（新產(chǎn)業(yè)）；2、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析，是以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng)，免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物，在信號(hào)試劑作用下發(fā)光，內(nèi)容來源于互聯(lián)網(wǎng)，信息真?zhèn)涡枳孕斜鎰e。如有侵權(quán)請(qǐng)聯(lián)系刪除。
