微生物計數(shù)方法？涂布平板法是一種常用的實驗技術(shù)，用于微生物計數(shù)。首先，需要準(zhǔn)備樣品稀釋液。具體步驟如下：取待測樣品10克，加入90毫升無菌水和小玻璃珠于250毫升三角瓶中，振蕩20分鐘使微生物分散，靜置后得到10-1稀釋液。 接著，用無菌吸管取1毫升10-1稀釋液，加入9毫升無菌水中，重復(fù)吹吸3次，那么，微生物計數(shù)方法？一起來了解一下吧。
測定微生物計數(shù)的方法有很多,主要有以下幾種：
1.血細(xì)胞計數(shù)法
將稀釋的菌液樣品滴在血細(xì)胞計數(shù)板上,在顯微鏡下計算4~5個中格的細(xì)菌數(shù),并求出每個小格所含細(xì)菌的平均數(shù),再以此為依據(jù),估算總菌數(shù).
①此法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌和活菌.
②對壓在小方格界線上的細(xì)菌,應(yīng)當(dāng)取平均值計數(shù).
③此法可用于測定培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化
2.稀釋涂布平板法
原理：每個活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養(yǎng)基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一個活菌.
①這一方法常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目
②統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低,原因是當(dāng)兩個活多個細(xì)胞連在一起時,平板上觀察到的只是一個菌落.因此統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示.
③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測定.但不適于測定樣品中絲狀體微生物,例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營養(yǎng)體等.
④此法若不培養(yǎng)成菌落,可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上,經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計數(shù),這樣又稱涂片計數(shù)法.染色可用臺盼藍(lán),臺盼藍(lán)能使死細(xì)胞染成藍(lán)色,可分別計數(shù)死細(xì)胞和活細(xì)胞.
3.濾膜法
濾膜法是當(dāng)樣品中菌數(shù)很低時,可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然后將濾膜干燥、染色,并經(jīng)處理使膜透明,再在顯微鏡下計算膜上（或一定面積上）的細(xì)菌數(shù).
此法也可以通過培養(yǎng)觀察形成的菌落數(shù)來推算樣品中的菌數(shù).例如測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目：將已知體積的水過濾后,將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng).在該培養(yǎng)基上大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色,可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目,計算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目.
此法也是統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目.
4.比濁法
原理是在一定范圍內(nèi),菌是懸液中細(xì)胞濃度與混濁度成正比,即與光密度成正比,菌越多,光密度越大.因此可借助與分光光度計,在一定波長下,測定菌懸液的光密度,以光密度表示菌量.實驗測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi),否則不準(zhǔn)確.
5.顯微鏡直接計數(shù)法
在課本生物選修1生物技術(shù)實踐P22中“除了上述活菌計數(shù)法外,顯微鏡直接計數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法.”這里說的顯微鏡直接計數(shù),我認(rèn)為應(yīng)該是在稀釋涂布的基礎(chǔ)上不培養(yǎng)成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計數(shù).再如濾膜法也一樣,可以有兩種情況.
另外,微生物計數(shù)法發(fā)展迅速,多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統(tǒng)計微生物的數(shù)目.
稀釋涂布平板法是一種精確的微生物計數(shù)方法，其原理基于微生物在固體培養(yǎng)基上形成的單個菌落的培養(yǎng)特征。這種方法的基本思想是，一個菌落通常由一個單獨(dú)的微生物細(xì)胞繁殖而成，因此每個菌落代表了一個微生物細(xì)胞。
在進(jìn)行計數(shù)前，首先需要將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，確保樣品中的微生物細(xì)胞分散開來，避免多個細(xì)胞黏在一起形成一個菌落。接著，選取適當(dāng)稀釋度和一定量的稀釋液，均勻地涂布于平板的培養(yǎng)基表面。通過這種方式，可以確保每個微生物細(xì)胞都有足夠空間生長，并最終形成獨(dú)立的菌落。
在適宜的培養(yǎng)條件下，微生物細(xì)胞將開始繁殖，形成可見的菌落。通過計數(shù)這些菌落的數(shù)量，可以推算出樣品中的微生物總數(shù)。這種方法不僅適用于各種類型的微生物，而且操作簡便，結(jié)果可靠。
值得注意的是，為了獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，需要精心控制稀釋度和接種量，確保每個菌落僅由一個微生物細(xì)胞形成。此外，培養(yǎng)過程中的溫度、濕度等條件也需嚴(yán)格控制，以避免雜菌干擾。
稀釋涂布平板法因其簡單易行、結(jié)果準(zhǔn)確等特點(diǎn)，在微生物學(xué)研究中得到了廣泛應(yīng)用。無論是實驗室科研，還是工業(yè)生產(chǎn)中的微生物檢測，該方法都是一種不可或缺的工具。
微生物計數(shù)方法多樣，其中血細(xì)胞計數(shù)法通過將菌液稀釋后滴在血細(xì)胞計數(shù)板上，在顯微鏡下計算4~5個中格的細(xì)菌數(shù)，以此估算總菌數(shù)。然而此法無法區(qū)分死菌與活菌，且對壓在小方格界線上的細(xì)菌需取平均值計數(shù)。該法適用于測定酵母菌種群數(shù)量變化，但不適于絲狀體微生物。
稀釋涂布平板法是常用統(tǒng)計活菌數(shù)目的方法，每個活細(xì)菌在適宜培養(yǎng)基上可形成一個菌落，代表樣品稀釋液中的一個活菌。但統(tǒng)計結(jié)果通常低于實際活菌數(shù)，因為兩個活細(xì)胞連在一起時，平板上僅顯現(xiàn)一個菌落。此法適用于多種材料中的細(xì)菌、酵母、芽孢與孢子等數(shù)量測定，但不適用于絲狀微生物。
濾膜法則在樣品菌數(shù)較低時適用，將樣品通過膜過濾器，干燥、染色后在顯微鏡下計算膜上的細(xì)菌數(shù)。此法同樣可培養(yǎng)菌落來推算樣品中的菌數(shù)，如測定飲用水中大腸桿菌數(shù)。比濁法基于菌懸液中細(xì)胞濃度與混濁度成正比，利用分光光度計測定光密度來表示菌量。顯微鏡直接計數(shù)法則是在稀釋涂布的基礎(chǔ)上不培養(yǎng)成菌落，通過染色在顯微鏡下直接計數(shù)。
隨著技術(shù)進(jìn)步，多種快速、簡易、自動化的儀器和裝置被開發(fā)用于微生物計數(shù)。總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞數(shù)的測定方法各異，總細(xì)胞數(shù)可用電子儀器或直接計數(shù)法，而活細(xì)胞數(shù)則需用膜過濾并在膜上染色后計數(shù)。
測定微生物數(shù)量的方法主要有以下幾種：
直接計數(shù)測定：
方法：根據(jù)微生物種類，使用血球計數(shù)板或細(xì)菌計數(shù)板進(jìn)行計數(shù)。
特點(diǎn)：這是一種直接觀察并計數(shù)微生物的方法，操作相對簡單且結(jié)果公認(rèn)。但耗費(fèi)時間較長，且需要較多的細(xì)胞量。
比濁法：
方法：基于菌懸液的濃度在一定范圍內(nèi)與光密度成正比的原則，使用分光光度計測量OD值，以O(shè)D值表示樣品菌液濃度。
原理：利用光散射測量技術(shù)，通過測量透射光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度的比值I/Io，或用散射光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度的比值Is/Io，來測定懸濁物質(zhì)的含量。
特點(diǎn)：比濁法操作相對簡便，能夠快速得到微生物數(shù)量的近似值，但結(jié)果可能受到多種因素的影響，如微生物種類、形狀、大小以及懸浮液的均勻性等。
以上兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，選擇哪種方法取決于具體的實驗需求和條件。
涂布平板法是一種常用的實驗技術(shù)，用于微生物計數(shù)。首先，需要準(zhǔn)備樣品稀釋液。具體步驟如下：
取待測樣品10克，加入90毫升無菌水和小玻璃珠于250毫升三角瓶中，振蕩20分鐘使微生物分散，靜置后得到10-1稀釋液。
接著，用無菌吸管取1毫升10-1稀釋液，加入9毫升無菌水中，重復(fù)吹吸3次，得到10-2稀釋液。如此類推，直至制備出10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9系列稀釋液。
選擇適當(dāng)?shù)南♂尪群苤匾鶕?jù)樣品特性來定。例如，細(xì)菌菌劑通常用10-7、10-8、10-9，土壤細(xì)菌用10-4、10-5、10-6，放線菌用10-3、10-4、10-5，真菌則用10-2、10-3、10-4。
平板接種培養(yǎng)包括混合平板培養(yǎng)法和涂抹平板培養(yǎng)法兩種方法：
1. 混合平板培養(yǎng)法
將無菌平板分別標(biāo)記為10-7、10-8、10-9，每種濃度設(shè)置三個重復(fù)。依次吸取10-9、10-8和10-7稀釋液，加入對應(yīng)編號的平板，然后倒入已融化的細(xì)菌培養(yǎng)基，輕輕搖晃混合，冷卻后倒置培養(yǎng)，待菌落形成后計數(shù)。
2. 涂抹平板計數(shù)法
與混合法相似，先熔化培養(yǎng)基并倒入平板，編號后接種0.1毫升不同稀釋度的菌液。用無菌刮鏟均勻涂抹，每個稀釋度設(shè)三個重復(fù)。
以上就是微生物計數(shù)方法的全部內(nèi)容，直接計數(shù)測定：方法：根據(jù)微生物種類，使用血球計數(shù)板或細(xì)菌計數(shù)板進(jìn)行計數(shù)。特點(diǎn)：這是一種直接觀察并計數(shù)微生物的方法，操作相對簡單且結(jié)果公認(rèn)。但耗費(fèi)時間較長，且需要較多的細(xì)胞量。比濁法：方法：基于菌懸液的濃度在一定范圍內(nèi)與光密度成正比的原則，使用分光光度計測量OD值，以O(shè)D值表示樣品菌液濃度。內(nèi)容來源于互聯(lián)網(wǎng)，信息真?zhèn)涡枳孕斜鎰e。如有侵權(quán)請聯(lián)系刪除。
